囧

实验室里没有应付Blunt End PCR产物的克隆用连接Kit
为了抑制严重的vector自连
两个方案：
一，把pfu Phusion的PCR产物丢到Taq PCR体系里面去反应一会儿，把Blunt end弄成Sticky end。不过据爱打橄榄球的新西兰人说，这样效率很低。
二，往酶切过后的vector里面加phosphatase，把切口dephosphoralate之。然而据我的经验，这样的连接效率会很低。

总之，都会很低……

事实上在设计实验之前就考虑过这个问题，本来想如果能找出两个可用的内切酶就可以避免，然而这口胡老天却只给我一个可用的。

安吧……大不了我挑100个菌落去测序……反正今天又准备了一堆，正好用来看看酶切出来的电泳结果和序列之间的关系。

顺带一提，上次的4个样品，三个自连，一个连进去，但是方向反了 囧